SILAC+IP-MS-蛋白質(zhì)互作定量分析整體服務(wù)

SILAC+IP-MS-蛋白質(zhì)互作定量分析整體服務(wù)簡(jiǎn)介：

利用IP純化蛋白質(zhì)復(fù)合物時(shí)，除了能捕獲到Target蛋白及其互作蛋白之外，細(xì)胞中一些與抗體/抗體偶聯(lián)材料（agarose、magnetic beads等）高親和的蛋白質(zhì)也會(huì)被一起捕獲下來(lái)（非特異性粘附蛋白），并且這些蛋白都是高豐度的。故而，在后續(xù)的LC-MS鑒定時(shí)，這些非特性的蛋白質(zhì)會(huì)被高頻率的檢測(cè)到。這就帶來(lái)了一個(gè)很困擾的問(wèn)題：由于沒(méi)有定量信息，在眾多鑒定到的蛋白質(zhì)中，如何才能排除非特性的粘附蛋白，找出真正的、與target特異性互作的蛋白。

將SILAC和IP技術(shù)相結(jié)合，借助SILAC引入質(zhì)量差異，IP完成后，蛋白質(zhì)復(fù)合物通過(guò)LC-MS分析，可同時(shí)完成定性（即鑒定，給出樣品中有那些蛋白質(zhì)）和定量（給出每個(gè)蛋白質(zhì)被IP富集的相對(duì)程度）。根據(jù)定量結(jié)果結(jié)合軟件統(tǒng)計(jì)分析，即可直接區(qū)分出那些是target特異性的相互作用蛋白（SILAC ratio＞1.0），那些是非特異性的粘附蛋白（SILAC ratio=1.0）。從而快速篩選和鎖定特異性的相互作用分子，后續(xù)生物學(xué)驗(yàn)證成功率明顯提高。

技術(shù)和實(shí)驗(yàn)方案”高、大、上“，能顯著提高文章的檔次。

SILAC+IP-MS-蛋白質(zhì)互作定量分析整體服務(wù)方案：

客戶(hù)只需提供基因名稱(chēng)和細(xì)胞株即可，我方負(fù)責(zé)完成后續(xù)所有實(shí)驗(yàn)，包括：

基因克隆與慢病毒制備。

穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建與鑒定。

細(xì)胞SILAC標(biāo)記及標(biāo)記效率檢測(cè)。

細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)。

IP純化蛋白質(zhì)復(fù)合物并SDS-PAGE分離。

切割條帶，LC-MS測(cè)試分析。

MS數(shù)據(jù)定性和定量分析，依據(jù)SILAC的定量值（SILAC ratio）篩選潛在的互作蛋白。

挑選潛在的候選驗(yàn)證蛋白（6個(gè)）進(jìn)行后續(xù)驗(yàn)證。承諾6個(gè)驗(yàn)證蛋白，至少給出1個(gè)陽(yáng)性的互作。

參考文獻(xiàn)：

Nat Immunol 2014, 15(2):112-117.

Proc Natl Acad Sci U S A 2014, 111(51):18219-18224.

Science 2013, 340(6131):475-478.

Nat Cell Biol 2013, 15(6):625-636.