293無血清培養基使用之細胞復蘇方法

　　293無血清培養基使用之細胞復蘇，小編為您介紹細胞復蘇的流程：

　　1）迅速取出凍存的細胞，在37℃水浴條件下進行解凍（可以在水中輕輕晃動，時間控制在60s以內）；

　　2）輕輕地混勻細胞并將融化的細胞全部移至15ml無菌離心管中，逐滴加入10ml預熱到37℃的培養基，離心換液（100g，5min）去除全部上清，加入新鮮培養基重懸，使得細胞密度達到0.4-0.66cells/ml；

　　3）將細胞置于37℃，5%CO2，轉速為110-175rpm的恒溫搖床中進行培養；

　　4）2-4天后通過人工或儀器測定細胞的密度及活率，如果細胞密度達到1.0*106cells/ml，活率達到85%以上則可進行傳代培養；

　　5）如果細胞密度低于1.0*106cells/ml，則建議對細胞進行離心（100g，5min），然后重懸于20-30ml的新鮮培養基中使得細胞密度為0.4-0.6*106cells/ml左右，并繼續培養至細胞正常生長則可進行傳代培養。

　　293無血清培養基描述：

　　Balance CD 293 培養基適用于懸浮培養條件下的HEK293細胞（如293-F,293-T, Expi-293F等）的高密度生長和瞬時轉染表達。 Balance CD 293 培養基含有細胞生長所需的全部營養成份，無需添加任何添加物即可使用。（注意：此培養基不包含抗生素以及血清）

　　293無血清培養基特點:

　　瞬時轉染專用培養基，適用于HEK293細胞高密度懸浮培養

　　無蛋白、無動物源、化學成分限定

　　即用型*培養基,無需添加額外成分

　　以上為293無血清培養基使用之細胞復蘇的方法，如需了解更多請聯系創凌生物！

　　產品使用方法：

　　細胞馴化

　　1）直接馴化

　　大部分情況下，培養于其他培養基中的細胞，可以直接適應Balance CD 293 medium，只要按照日常傳代方式（稀釋）更換培養基即可。

　　2）漸進式馴化

　　注意：選用低代次、處于對數生長期的細胞進行馴化

　　①在原培養基中復蘇細胞并繼續使用該培養基傳代2到3次至細胞生長穩定，當細胞密度達到2x10 6 cells/ml后進行傳代，傳代細胞密度控制在0.5-0.6×10 6 cells/mL，5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與Balance CD 293培養基的比例為75:25；

　　②將細胞置于37℃，5% CO2，轉速為110-175 rpm的恒溫搖床中進行培養；

　　③當細胞密度3-4天后達到3x10 6 cells/ml且細胞活率>90%，傳代時5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與Balance CD 293培養基的比例為50:50，細胞密度控制在0.5×10 6 cells/mL。如細胞生長慢，可離心上清，留20%條件培養基，加入80%的5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與Balance CD 293 培養基比例為75:25的混合培養基，繼續培養；

　　④重復步驟③逐步增加Balance CD 293培養基所占的比例(5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與Balance CD 293 培養基的比例為25:75至10:90）直到100%的Balance CD 293培養基；

　　⑤經過在100%的 Balance CD 293 培養基中的幾次傳代培養，傳代后3-4天細胞的密度可以達到2-3×10 6  cells/mL，細胞活率大于90%，這說明細胞已經*適應了Balance CD 293 培養基。之后進行細胞的傳代培養時，細胞的起始密度可以降到0.3×10 6 cells/mL，一般傳代2-3次后再進行轉染實驗。

　　注意: 一般細胞馴化過程中，前三代細胞的狀態可能不是很好，但一般從第四代狀態會有改善。

　　細胞傳代

　　1）取細胞培養樣品，人工或儀器測定細胞密度以及活率；

　　2）計算傳代所需的細胞用量，建議起始細胞密度為0.2-0.4×10 6 cells/mL。建議復蘇的細胞至少培養兩代后再用于其他用途。傳代培養體積建議為15-20 mL（100 mL的培養瓶）或50-60 mL（250 mL 的培養瓶）；

　　3）將細胞置于37℃，5%CO2，轉速為110-175 rpm的恒溫搖床中進行培養，3-4天傳代一次。

　　細胞轉染在Balance CD 293培養基中，采用商業化轉染試劑（例如 Gibco 293Fectin?ExpiFectamine? 293 Transfection Kit ）或 PEI 可以實現對 HEK293 細胞的高效轉染。