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      EPC細胞免疫熒光實驗報告
      更新時間:2019-12-11   點擊次數:2893次

      一、 實驗儀器與試劑

      表格一:實驗儀器

      儀器

      廠家

      型號

      細胞培養箱

      Thermo Scientific

      HERA cell CO2

       激光共聚焦顯微鏡

      Leica

      TCS SP5

      表格二:試劑

      試劑

      廠家

      細胞培養基

      Gibco

      PBS (0.1 M, pH 7.4)

      自配

      4 %多聚甲醛溶液

      索來寶

      BSA

      Sigma

      Triton-x-100

      生工生物

      FITC 標記羊抗兔熒光二抗

      Santa Cruz

      DAPI

      碧云天

      二、 實驗步驟

      制作細胞爬片,根據實驗方案進行加樣操作;

      反應 24h 后,棄原有培養液, PBS 洗 1 次;

      4%的多聚甲醛 4 度固定 15 分鐘,PBS 洗 2 次,5 分鐘/次;

      4. 加入 0.1%的 Triton-x-100,室溫孵育 15 分鐘;

      5. PBS 洗 3 次,5 分鐘/次;

      6. 10%BSA 封閉 30 分鐘;

      加入一抗 50μL(稀釋度為 1:100),4℃過夜孵育;

      第二天復溫 30min,PBS 洗 3 次,5 分鐘/次;

      每組分別加入 FITC 標記羊抗兔熒光二抗 50μL(稀釋度為 1:500),37℃培養 30 分鐘;

      PBS 洗 3 次,每次 5 分鐘;

      11. DAPI 染色 5 分鐘;

      PBS 洗 3 次,每次 5 分鐘;

      在激光共聚焦顯微鏡上觀察(使用 405nm 和 488nm 的激發光源進行熒光檢測)。  

      三、 實驗結果

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